承接净化工程、洁净实验室、GMP车间、细胞间规范改造建设

承接净化工程、洁净实验室、GMP车间、细胞间规范改造建设

1.洁净室的布局
根据样品检验要求，一般应至少包括更衣缓冲系统、微生物限度检查室、无菌检查室、阳性菌室和物流通道。
更衣系统应至少包括一更(含更鞋)、二更(含洗手)、缓冲以及人流走廊等。
物流通道应考虑净污分流的布局，有条件的可设置污物走廊。

2.洁净室的设计要求
净化级别：洁净走廊、检查室、阳性菌室应为一万级;其他房间应为十万级
气流组织：阳性菌室对走廊呈负压，走廊对缓冲有5Pa的正压;阳性菌室全排风电气控制：控制开关外置;设置通讯系统。

3.结构与要求
无菌洁净室不宜设在底层，防潮、防霉、采光好，远离交通干道，厕所及污染区，面积不超过10m2，高度不超过2.4m，由两个缓冲间、操作间组成。操作间缓冲间之间应有样品传递窗，出入操作间和缓冲间的门不应直对。无菌室内应六面光滑平整，无缝隙，不起灰，不落尘，耐腐蚀，易清洗，墙壁与地面、墙壁与天花板连接处应呈凹弧形，操作间不得安装下水道。
无菌室内的照明灯应嵌装在天花板内，采光面积要大，光照应分布均匀，光照度不低于300勒克斯。缓冲间和操作间应装有紫外线杀菌灯(2-25w/m3)""用于空气消毒。紫外线波长200-300nm者具有杀菌作用，其中以265-266nm杀菌作用强，这与DNA的吸收光谱范围一致，其杀菌机理可能是在细菌细胞DNA中引起胸腺嘧啶双聚体形成，从而干扰细菌细胞DNA复制，导致细菌变异死亡。紫外线杀菌灯1m以内距离杀菌效果佳，每次开灯照射时间为30min。应定期检查紫外线灯辐射强度，不得低于70μW•cm-21m距离。其缺点是穿透力弱，一张纸板可以阻碍光的透过，不能穿透固体物，故只能用作表面消毒及一些不耐热或化学消毒剂物品的消毒。

4.温度、湿度
无菌室内温度和相对湿度直接影响紫外杀菌灯的杀菌效果，故温度好控制在25±2℃，相对湿度40-60%。操作间或净化工作台的洁净空气应保持对环境形成正压，不低于49Pa。

5.操作间
无菌室内应安装空气除菌过滤层流装置及调温装置。洁净度要求：净化工作台洁净度为100级，无菌室应为10000级。
操作间应准备乙醇灯(或煤气灯)，火柴，2%碘酊棉球及75%乙醇棉球、试管架、大小橡皮乳头、砂轮、记号笔、无菌剪刀、镊子、注射器等。微生物限度检查无菌室操作间内还应有电子称(感觉为0.1g，大称量为300g为宜)，电动匀浆仪等。

6.缓冲间
缓冲间内应有洗手盆，消毒液，无菌衣，帽，口罩，拖鞋等，缓冲间内不应放置培养箱和其他杂物。

(二)洁净室的使用

1.在实验开始之前1小时启动风机系统(空调系统)，并开启空气消毒装置，消毒至少半小时后关闭
2.观察并确保洁净室的压差
3.物品经物流通道进入洁净室
4.人员正确着装后经人流通道进入洁净室
5.使用完毕，应用消毒液清洁工作台面。实验人员在更衣室换下无菌工作衣后出洁净工作室。开启空气消毒装置，消毒至少半小时后，关闭洁净工作室的控制开关。

(三)洁净室的清洁维护
1.洁净室的清洁维护分为日常维护、定期维护和不符合时的维护。
2.日常维护由每次实验的实验人员进行，维护的范围为进行实验的洁净工作室和辅助洁净区，维护的频率为每次实验后。
3.定期维护由实验室专人进行，维护的范围为所有洁净工作室，维护的频率为每二周一次。
4.不符合时的维护由实验人员进行，维护的范围为所有不符合的洁净室，维护的时机为出现不符合时

(四)洁净室的验证

1.验证的项目
洁净度、微生物数、换气次数、静压差、照度、温度、相对湿度
2.验证的技术要求
验证项目十万级 一万级 一百级
温度(℃)18-26 20-24 20-24
相对湿度(%)45-65 45-60 45-60
换气次数(次/h)不小于15不小于25
压差(pa)相对室外：10有级差的洁净室之间：照度(Lx)主要工作室≥300辅助工作室≥150
悬浮粒子数(粒/m3)≥0.5um 3500000 350000 3500≥5um 20000 2000 0
浮游菌数(个/ m3)500 100 5
沉降菌(个/皿)10 3 1
3.验证的周期
建议每半年一次，也可根据洁净室的使用频率适当增加验证次数。
4.验证的方法
洁净度和微生物数：采用GB/T16292~16294-1996，其他项目：参照JGJ71-90。
5.验证不符合项的处理
当洁净度、微生物数、换气次数、静压差等指标出现不符合时，应停用洁净室，对净化系统进行调整后，在重新验证，直至符合规定才能重新启用洁净室。
当温度、相对湿度和照度等指标出现不符合时，洁净室可不必停用，但应及时修复空调系统(或更换照明装置)，使其符合规定。